GFP-Catcher (agarose magnetic beads)

Produktnummer ABIN7272855

Kurzübersicht für GFP-Catcher (agarose magnetic beads) (ABIN7272855)

Target: GFP (Green Fluorescent Protein (GFP))

Applikation: Protein Complex Immunoprecipitation (Co-IP), Immunoprecipitation (IP), Purification (Purif), Chromatin Immunoprecipitation (ChIP), RNA-Binding Protein Immunoprecipitation (RIP)

Bead Ligand: Antibody

Bead Matrix: Magnetic Agarose beads

Bead Size: 90 μm

Produktdetails

Highlights:

• Hochaffiner Anti-GFP Single-Domain-Antikörper (sdAb), kovalent gebunden an 4 % vernetzte Agarose-Magnetkügelchen mit 50-150 µm Durchmesser.
• Der Alpaca sdAb-Klon 1H1 ist spezifisch für GFP und viele GFP-Derivate. Kapazität >3 µg GFP pro µL gepackte Beads.
• Kompatibel mit physiologischen Puffern, gängigen Lyse- und Waschpuffern und hochstringenten Puffern.

Reaktivität: Aequorea victoria

Verwendungszweck: GFP-Catcher is based on a high-affinity single-domain antibody (sdAb) that is covalently immobilized on 4% cross-linked magnetic agarose.

Spezifität: GFP (green fuorescent protein) and common GFP derivatives like EGFP, mEGFP, Sirius, tSapphire, Cerulean, eCFP, mTurquoise, acGFP, Emerald, superecliptic pHluorin, paGFP, superfolder GFP, eYFP, mVenus and Citrine. Other not tested.

Keine Kreuzreaktivität: Does not cross-react with mCherry, dsRed, mRFP, mTagBFP or their most common derivatives.

Produktmerkmale: GFP-Catcher is based on a high-affinity alpaca single-domain antibody (sdAb) that is covalently immobilized on 4 % cross-linked magnetic agarose beads. The innovative, oriented and selective attachment via a flexible linker guarantees a high accessibility of the sdAbs and largely eliminates batch-to-batch variations. Due to the single-chain nature of sdAbs and their covalent attachment, no "leakage" of light and heavy chains from IgGs is observed during elution with SDS sample buffer.
GFP-Catcher thus features high affinity and superior capacity for GFP fusion proteins while showing negligible non-specific background.
GFP-Catcher immobilizes a wide range of GFP derivatives.
GFP-Catcher is compatible not only with physiological buffers but also with high stringency buffers.
GFP-Catcher thus provides great freedom to adjust the binding and washing conditions to the experimental needs.

Benötigtes Material: wash buffers, columns, tubes

Produktspezifische Information:

Unser GFP Catcher ist ein Produkt, das auf der GFP Pull-Down-Technik basiert und zur Isolierung von GFP-Fusionsproteinen aus Zelllysaten verwendet wird. Es besteht aus speziellen magnetischen Beads (Produkt ABIN7272855) bzw. Agarose Beads (Produkt ABIN5311508), die mit einem Antikörper gegen GFP beschichtet sind. Diese Beads ermöglichen eine effiziente und selektive Bindung an GFP oder GFP-fusionierte Zielproteine.

Die Anwendung von GFP Catcher ist ähnlich wie bei der GFP Pull-Down-Methode. Zunächst wird das zu untersuchende Protein in den Zellen exprimiert, wobei es mit GFP fusioniert ist. Anschließend wird das Zelllysat hergestellt, um die Zielproteine zu extrahieren. Die GFP Catcher-Beads werden dann in das Zelllysat gegeben und durch die spezifische Bindung an das GFP oder das GFP-Fusionsprotein an diese Proteine gebunden.

Nachdem die Beads mit den gebundenen Zielproteinen isoliert wurden, erfolgt eine gründliche Reinigung, um nicht spezifisch gebundene Komponenten zu entfernen. Schließlich können die Zielproteine von den Beads abgetrennt und für weitere Analysen wie Immunoblotting oder Massenspektrometrie verwendet werden.

GFP Catcher bietet den Vorteil einer schnellen und einfachen Isolierung von GFP-Fusionsproteinen. Es ist ein nützliches Werkzeug für die Proteinanalyse und ermöglicht die effiziente Identifizierung von Proteinen, die mit dem GFP-Fusionsprotein in Wechselwirkung treten. GFP Catcher wird häufig in der zellbiologischen Forschung eingesetzt, um Protein-Protein-Interaktionen zu untersuchen und das Verständnis der zellulären Prozesse zu vertiefen.

Anwendungsinformationen

Kommentare:

4% cross-linked magnetic agarose (bead size 50-150 μm) with covalently immobilized single-domain antibody

Protokoll:

This protocol provides a general outline of how to use GFP-Catcher (agarose magnetic beads) for immunoprecipitation using a microcentrifuge for sedimentation. Alternatively, it is possible to use GFP-Catcher agarose beads in spin columns. All protocol steps should be carried out at 4 °C.

1. For mammalian cells, harvest 10⁶-10⁸ cells per sample.
2. Lyse cells according to established protocols in 0.2 to 1.5 mL volume. Recommended Buffer Conditions: GFP-Catcher resins are compatible with commonly used Lysis and Washing buffers, e.g. RIPA buffer. The following buffer conditions have been tested:
   • pH ranging from pH 5 to pH 9
   • 2 % Triton X-100, 1 % Tween-20, 1 % NP-40, 1 % CHAPS, 1 % Deoxycholate, 0.1 % SDS
   • 4 M NaCl, 2 M KCl, 1 M MgCl₂
   • 100 mM EDTA
   • 4 M urea
   • 10 mM DTT, 10 mM 2-Mercaptoethanol
   • Protease Inhibitors
   • RNAse A, DNAse I, Benzonase
3. Centrifuge cell lysates in microcentrifuge tubes for 10 min at 14.000 x g at 4 °C. Keep a small samples as “input” fraction.
4. Transfer the supernatant to a fresh microcentrifuge tube for each sample and keep at 4 °C.
5. Homogenize the GFP-Catcher (agarose magnetic beads) slurry gently by shaking.
6. Transfer 20 μL bead slurry to a 1.5 mL microcentrifuge tube for each sample.
7. Add 1 mL Lysis Buffer to equilibrate GFP-Catcher (agarose magnetic beads).
8. Place the tubes on a magnet stand until the fluid is clear. Remove the supernatant carefully.
9. Repeat wash steps once for a total of two washes.
10. Resuspend equilibrated GFP-Catcher (agarose magnetic beads) gently with the cell lysate supernatant.
11. Rotate the microcentrifuge tubes for 1 h at 4 °C.
12. Place the tubes on a magnet stand until the fluid is clear. Keep a small aliquot of the supernatant as “unbound” fraction. Carefully remove the supernatant.
13. Resuspend GFP-Catcher (agarose magnetic beads) in 1 mL Lysis Buffer.
14. Place the tubes on a magnet stand until the fluid is clear and carefully remove the supernatant.
15. Repeat wash steps twice for a total of three washes.
16. Resuspend GFP-Catcher (agarose magnetic beads) gently in 1 mL TBS.
17. Place the tubes on a magnet stand until the fluid is clear and carefully remove the supernatant.
18. Repeat wash steps once for a total of two washes.
19. Resuspend GFP-Catcher (agarose magnetic beads) resin in 50 µL 2X SDS samples buffer.
20. Heat GFP-Catcher (agarose magnetic beads) resin for 5 min to 95 °C.
21. Place the tubes on a magnet stand until the fluid is clear and transfer the supernatant to fresh microcentrifuge tubes. Keep the GFP-Catcher (agarose magnetic beads) as backup.

Beschränkungen: Nur für Forschungszwecke einsetzbar

Handhabung

Buffer: 50 % slurry in PBS containing 20 % Ethanol

Lagerung: 4 °C

Informationen zur Lagerung: Store at 4°C for up to 12 months. Do not freeze!

Haltbarkeit: 12 months

Antigendetails

Target: GFP (Green Fluorescent Protein (GFP))

Andere Bezeichnung: GFP