TR-FRET Assays
TR-FRET (Time-Resolved Fluorescence Energy Transfer) ist eine spezielle Form des FRET (Förster Resonance Energy Transfer), bei der langlebige Emissions-Fluorophore als Donoren verwendet werden.
Für die Untersuchung von Protein-Protein-Interaktionen wurden Methoden, wie zum Beispiel FRET etabliert, die den Energietransfer vom Fluoreszenzlicht auf ein zweites Fluorophor nutzen. Dies geschieht nur, wenn sich zwei Moleküle in unmittelbarer Nähe befinden und somit mit hoher Wahrscheinlichkeit interagieren. Dazu sind zwei Proteine erforderlich, die an verschiedene Fluorophore gekoppelt sind: ein Donor, der nach der Anregung Licht aussendet und den Akzeptor-Fluorophor nur dann anregt, wenn die gebundenen Proteine interagieren. Das Verhältnis von Akzeptor- zu Donorfluoreszenz gibt Rückschlüsse auf die räumliche Nähe der beiden Proteine.
Time Resolved FRET
Als Donor bieten sich vorzugsweise Moleküle mit langer Emissionsdauer (time resolved FRET, TR-FRET). Dadurch kann das Signal zu einem späteren Zeitpunkt und über einen längeren Zeitraum erfasst werden und die Hintergrundfluoreszenz wird minimiert.
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