Durchflusszytometrie (FACS): Allgemeine Hinweise

Protokoll für die Durchflusszytometrie (FACS)

Auf antikoerper-online.de stehen Ihnen mehr als 40.000 Antikörper für die Durchflusszytometrie (FACS) zur Verfügung. Hier finden Sie allgemeine Hinweise zur Verwendung dieser Antikörper in einer Durchflusszytometrie:

Zellen:

Lagern Sie die Zellen möglichst auf Eis bis Sie sie verwenden. Stellen Sie sicher, dass Ihre Zellsuspension keine störenden Mediumbestandteile enthält, die die Messergebnisse verfälschen (z.B. Phenolrot oder ähnliche Farbstoffe). Waschen Sie die Zellen gründlich, bevor Sie sie färben.

Antikörpermenge:

Bei der benötigten Antikörpermenge können Sie sich an die Angaben des Herstellers halten. Empfehlenswert ist es, in Vorexperimenten die für Sie optimale Menge selbst zu bestimmen. Färben Sie dazu Ihre Zellen mit unterschiedlichen Antikörper-Mengen, um die niedrigste Konzentration, bei der die Antikörper noch im Überschuss vorliegen, heraus zu finden.

Lagerung der gefärbten Zellen:

Die besten Ergebnisse erzielen Sie, wenn Sie die Zellen sofort nach der Färbung messen. Ist dies nicht möglich, so können Sie die Zellen einige Stunden im Kühlschrank aufbewahren. Wollen Sie die gefärbten Zellen länger aufbewahren (z.B. über Nacht), so empfiehlt es sich die Ansätze mit 1% Paraformaldehyd zu fixieren.

Puffer:

Benutzen Sie möglichst eiskalte Puffer und Reagenzien. Benutzen Sie PBS ohne Mg2+ und Ca2+. Niedrige Temperaturen und der Zusatz von Natriumazid verhindern, dass die Oberflächenantigene modifiziert oder internalisiert werden.

Gelöste Antikörper:

Zentrifugieren Sie die Antikörper-Suspension kurz ab, bevor Sie sie in die Röhrchen geben. Oft befinden sich Tröpfchen an der Gefäßwand oder am Deckel. Bewahren Sie die gelösten Antikörper im Dunkeln im Kühlschrank auf. FACS-Röhrchen mit vorgelegtem Antikörper sollten ebenfalls im Kühlschrank gelagert werden. Die Flurochrome, die an die Antikörper gekoppelt sind, sind lichtempfindlich.

Kontrollansätze:

Planen Sie die nötigen Kontrollansätze ein (ungefärbt, Isotyp(en), bei Doppelfärbung: jeweils eine einfach gefärbte Probe für jeden Antikörper). Die Kontrollansätze dienen dazu die Messparameter am FACS-Gerät einzustellen bzw. bei der Auswertung der Messungen die falsch-positiven Zellen (unspezifische Bindung über Fc-Rezeptoren) zu erkennen (Isotypen-Kontrolle).

Hier finden Sie mehr als 40.000 Antikörper für die Durchflusszytometrie (FACS).

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